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IMVIC – Prueba del Indol

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IMVIC prueba del indol
IMVIC-Prueba del Indol.

La prueba del indol se usa para demostrar la capacidad de un microorganismo de formar indol a partir del triptófano. La presencia o ausencia de indol se emplea para la identificación bacteriana.

Se denomina IMVIC a un conjunto de cuatro pruebas bioquímicas que se usan para la identificación de Enterobacterias: Indol, Rojo de Metilo, Voges-Proskauer y Citrato. 

Bioquímica de la formación del indol.

El triptófano es un aminoácido que puede ser oxidado por algunas bacterias para formar tres metabolitos: indol, escatol y ácido indolacético.

Un grupo de enzimas denominadas de forma conjunta “triptofanasa” son las encargadas de hidrolizar el triptófano mediante reacciones de desaminación.

El indol liberado de la molécula de triptófano se puede detectar mediante la adición de un reactivo que produce un color característico.

La adición de reactivo de Ehrlich o Kovacs produce un compuesto coloreado rojo o fucsia.

La reacción de color se basa en la estructura pirrol del indol. Al adicionar p-Dimetilaminobenzaldehído (DMABA) en HCl concentrado se produce la condensación con el aldehído. La capa alcohólica extrae y concentra el color rojo.

Medios de cultivo para la prueba del indol.

La mayoría de los preparados comerciales de peptonas contienen suficiente triptófano para la lectura del indol. Sin embargo, existen medios definidos específicos para la prueba del indol como el caldo triptófano.

Otros medios combinados donde se evalúan varias características y se mide el indol son:

  • Medio para Motilidad-indol-ornitina (MIO).
  • Sulfuro-indol-motilidad (SIM).
  • Medio Motilidad-indol-lisina (MIL).
panel comercial para la determinación de indol
En los paneles comerciales también está disponible la determinación del indol añadiendo reactivo de Kovacs.

Reactivo de Ehrlich.

El reactivo de Ehrlich está compuesto por una solución coloreada (amarillo) estable a temperatura ambiente (22-25°C) cuando se conserva en un frasco color ambar. Químicamente posee:

  • 1g de Ρ-Dimetilaminobenzaldehído (DMABA).
  • 95ml de Alcohol etílico.
  • 20 ml de HCl concentrado.

Método de uso:

  1. Añade 1 ml de éter o xileno a un tubo de medio con triptófano incubado 24 a 48 horas para extraer y concentrar el indol.
  2. Agita bien.
  3. Espera que el éter suba a la superficie del medio.
  4. Agrega 0,5 ml de reactivo de Ehrlich suavemente por las paredes del tubo.

Reactivo de Kovacs.

Es una solución pálida que se debe conservar en frasco ambar compuesta por:

  • 150 ml de Alcohol amílico o isoamínico puro.
  • 10g de Ρ-Dimetilaminobenzaldehído (DMABA).
  • 50 ml de HCl concentrado.

Método de uso:

  1. Agregar 5 gotas de reactivo de Kovacs directamente a un tubo incubado 24 a 48 horas.
  2. Agite el tubo suavemente.
resultado de la prueba del indol positivo y negativo
Indol Positivo: color fucsia. Indol Negativo: permanece amarillo.

Interpretación de la prueba del indol con Ehrlich y Kovacs.

  • Positivo: rápidamente (en segundos) aparece un anillo rojo (fucsia) en la interfase del medio.
  • Negativo: no hay cambio o aparición de color (permanece amarillo).
  • Variable: aparición de color naranja por presencia del escatol.

Consideraciones de la prueba del indol.

  • Si se usa un tubo incubado 24 horas, es recomendable separar una alícuota de 2ml para repetir a las 48 horas en caso de resultado negativo.
  • Debe aplicar control de calidad de los reactivos con cepas controles semanalmente.
  • Los reactivo se conservan a 4°C mientas no están en uso.
  • El reactivo de Kovacs es más sensible.
  • Para no fermentadores como Flavobacterium y para anaerobios se  usa preferiblemente el reactivo de Ehrlich.
  • Los reactivos no son tinciones ni colorantes, son compuestos acoplados que por hidrolisis se condensan para formar un cromóforo.

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