Inicio Análisis Clínicos IMVIC – Prueba rojo de metilo.

IMVIC – Prueba rojo de metilo.

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La prueba Rojo de metilo es valiosa para la identificación bacteriana de especies que producen fuertes ácidos a partir de la fermentación de glucosa por la vía ácido mixta.

Bioquímica de la prueba rojo de metilo.

Los microorganismos rojo de metilo positivo (MR positivo) producen ácidos estables que mantienen una alta concentración de iones hidrógeno.

Todas las Enterobacterias son fermentadoras de glucosa por definición, sin embargo, utilizan vías diferentes para ejecutarla. La prueba rojo de metilo se basa en el uso de un indicador de pH (rojo de metilo) para determinar la concentración de ion hidrógeno posterior a la fermentación de glucosa por las vías de ácidos mixtos: láctico, acético, succínico y fórmico.

La fermentación de la glucosa por la vía ácido mixta produce ácidos estables que mantienen el medio con un pH menor a 4.4.

Los microorganismos Rojo de metilo negativo también producen ácidos, pero la concentración de iones hidrógeno es menor ya que hacen una reversión hacia la neutralidad causada por la degradación de los ácidos a otros productos que aumentan el pH del medio.

Medio de cultivo para la prueba Rojo de Metilo.

Se emplea el medio de Clark y Lubs, también llamado caldo Rojo de Metilo/Voges-Proskauer (MR/VP) que está compuesto por:

  • 7g de Polipeptona o peptona de carne tamponada.
  • 5g de dextrosa.
  • 5g de Buffer fosfato dipotásico.
  • 1000 ml de agua desionizada.

Ejecución de la Prueba Rojo de Metilo.

  1. Se inocula el medio con un crecimiento puro de 18 a 24 horas.
  2. Se incuba a 35°C por un mínimo de 48 horas.
  3. Para revelar la prueba se añade directamente a una alícuota incubada 5 gotas de indicador de Rojo de Metilo.

Como el medio MR/VP se emplea para 2 pruebas, conviene inocular dos tubos o separar una alícuota incubada para revelar el Vosges Proskauer a las 24 horas y dejar el RM en incubación hasta el mínimo de 48 horas.

Interpretación de la prueba Rojo de Metilo.

A.Negativo: Amarillo (pH: 6). B.Positivo: Rojo (pH menor a 4.4).
  • Rojo de Metilo positivo: si el microorganismo es MR positivo el indicador permanece rojo brillante en la superficie del medio. Lo que indica que el pH está por debajo de 4.4.
  • Negativo: se observa un color amarillo en la superficie del medio. Ésto indica un pH de 6.
  • Reacción tardía: un color naranja rojizo indica que el microorganismo produce menos ácido a partir del sustrato y se debe continuar la incubación hasta 4 días para repetir la prueba.

Batería IMVIC.

La batería IMVIC se refiere a la interpretación en orden de las pruebas: Indol, Rojo de metilo, Voges-Proskauer y Citrato para la identificación de Enterobacterias. Hoy día se usa poco en conjunto pero si las pruebas individualmente.

Batería Imvic de Enterobarter
Batería IMVIC para Enterobacter.

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